北京普析通用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)儀器操作

對(duì)TU-19系列儀器的所有操作幾乎都是與PC聯(lián)機(jī)后通過(guò)UVWin軟件進(jìn)行的。在 對(duì)儀器進(jìn)行操作前請(qǐng)通過(guò)UVWin軟件使用說(shuō)明書(shū)，詳細(xì)了解UVWin的使用。本章只針 對(duì)雙光束測(cè)量的特點(diǎn)作相關(guān)說(shuō)明，并以三個(gè)真實(shí)的分析過(guò)程為例介紹使用TU-19系列 儀器的一般過(guò)程。

關(guān)于雙光束測(cè)量

什么叫雙光束

雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在光路設(shè)計(jì)上采用兩束能量基本一致的光同時(shí)分別對(duì) 樣品和參比進(jìn)行測(cè)量（如下圖3-1所示，R和S分別為參比和樣品兩路光束），通過(guò)參 比光束實(shí)時(shí)反饋補(bǔ)償測(cè)量系統(tǒng)的穩(wěn)定性，提高儀器的穩(wěn)定性和測(cè)量精度。

在儀器結(jié)構(gòu)上，雙光束儀器與準(zhǔn)雙光束和單光束最大的不同在于，雙光束儀器的樣 品室有兩路光，可以同時(shí)在兩路光上放置參比和樣品

使用雙光束儀器

雙光束儀器在使用上和單光束（或準(zhǔn)雙光束）的差別在于：?jiǎn)喂馐鴥x器在校零和測(cè) 量時(shí)，分兩次將空白和樣品放入樣品池架中進(jìn)行測(cè)量；而雙光束儀器則是將空白和樣 品一次分別放入?yún)⒈群蜆悠穬陕烦丶苤校缓筮M(jìn)行校零和測(cè)量操作。

在進(jìn)行暗電流校正時(shí)，雙光束儀器的黑擋塊只需要放置在樣品光路的樣品池架上 進(jìn)行操作即可。

您可以通過(guò)下一節(jié)的幾個(gè)實(shí)例來(lái)熟悉本機(jī)在實(shí)際測(cè)量中的操作。

實(shí)例應(yīng)用

本節(jié)列舉了 19最基本應(yīng)用的三個(gè)實(shí)例

光度測(cè)量實(shí)例

維生素B1可以促進(jìn)碳水化合物和脂肪的代謝，提供神經(jīng)組織所需要的能量，防止 神經(jīng)組織和退化。預(yù)防和治療腳氣病。而實(shí)際藥廠出產(chǎn)的維生素B1品質(zhì)檢測(cè)需要 在400nm下測(cè)定其吸光度值，當(dāng)其值不超過(guò)0.020時(shí)，為合格品。

應(yīng)用TU-19系列進(jìn)行維生素B1品質(zhì)檢測(cè)，需要使用UVWin軟件對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行 光度測(cè)量，具體操作步驟如下：

① 試劑配置

首先取1g維生素B1溶于10mL去離子水中作為樣品；然后，取兩個(gè)干凈配對(duì)的石 英比色皿,分別裝上去離子水作為參比溶液。

② 儀器開(kāi)機(jī)

先打開(kāi)與TU-19系列雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)相連的計(jì)算機(jī)，進(jìn)入Windows操 作環(huán)境。確認(rèn)樣品室中無(wú)擋光物后，再打開(kāi)光度計(jì)的電源開(kāi)關(guān)，開(kāi)啟UVWin操作軟件, 儀器進(jìn)入初始化過(guò)程。自檢無(wú)誤后，儀器進(jìn)主工作程序。開(kāi)機(jī)預(yù)熱60mino

④暗電流校正

將隨機(jī)附帶黑擋塊放入樣品光路上的樣品池中，使用UVWin的暗電流校正功能進(jìn) 行儀器暗電流校正。暗電流校正完畢后取出黑擋塊。

提示：進(jìn)行暗電流校正可以消除儀器部分噪聲，保證樣品的測(cè)量結(jié)果更為準(zhǔn)確。您不需要在

每次測(cè)量時(shí)都進(jìn)行暗電流校正，一般在儀器環(huán)境發(fā)生變化時(shí)才必須進(jìn)行儀器的暗電流校正，所 謂的環(huán)境變化主要是指：環(huán)境溫度變化較大時(shí)、安裝位置改變、做高吸收度樣品時(shí)等。（建議您 在啟動(dòng)儀器預(yù)熱后，在進(jìn)行測(cè)量前進(jìn)行暗電流校正，保證數(shù)據(jù)結(jié)果的準(zhǔn)確性）。

⑤校零

將裝有去離子水的兩個(gè)配對(duì)石英比色皿分別放入樣品光路樣品池和參比光路樣品 池中，然后合上樣品室蓋，按“校零"按鈕進(jìn)行校零操作，此時(shí)在軟件主界面上方顯示的 實(shí)時(shí)吸光度值應(yīng)該為0.000 Abs或非常近似的值。

⑥樣品測(cè)量

取出放置于樣品光路樣品池中的比色皿,倒掉去離子水，用維生素B1樣品溶液清 洗至少3遍后盛入樣品溶液。將盛有樣品溶液的比色皿放置于樣品光路的樣品池架上， 合上樣品室蓋，按“開(kāi)始"按鈕進(jìn)行測(cè)量。等待一次測(cè)量完成后，再次按“開(kāi)始"可以測(cè) 量下一個(gè)數(shù)據(jù)。通過(guò)對(duì)多組測(cè)量數(shù)據(jù)取平均可以得到樣品的測(cè)量結(jié)果。

⑦結(jié)果分析

對(duì)測(cè)量得到結(jié)果,您可以保存為UVWin專用的文件格式，方便日后打開(kāi)查看，也可 以打印輸出。

光譜掃描實(shí)例

維生素B12在361 nm處有特征吸收峰，因此在測(cè)量維生素B12光譜時(shí)，測(cè)量者對(duì) 該波長(zhǎng)下的吸光度值比較關(guān)注。下面就以維生素B12為例說(shuō)明如何使用光譜測(cè)量。

采用TU-19系列雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)對(duì)維生素B12進(jìn)行吸收峰的測(cè)量步驟 如下：

①試劑配置

取標(biāo)準(zhǔn)維生素B12注射液，按照B12與去離子水1:10的比例混合得到10mL稀釋 溶液。取兩個(gè)配對(duì)石英比色皿，都倒入去離子水（去離子水作為參比溶液）。

②儀器開(kāi)機(jī)

先打開(kāi)與TU-19系列雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)相連的計(jì)算機(jī)，進(jìn)入Windows操 作環(huán)境。確認(rèn)樣品室中無(wú)擋光物后，再打開(kāi)光度計(jì)的電源開(kāi)關(guān)，開(kāi)啟UVWin操作軟件, 儀器進(jìn)入初始化過(guò)程。自檢無(wú)誤后，儀器進(jìn)入主工作程序。開(kāi)機(jī)預(yù)熱60min。