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離心機(jī)常用的離心方法:
1.差速離心法:采用不同的離心速度和離心時間,使沉降速度不同的顆粒分步離心的方法,稱為差速離心。操作時,將含有兩種不同顆粒的混懸液,以常速離心,使大的顆粒下沉,將上清液傾倒于另一離心管中,再加大離心力,離心一定時間,分離小的顆粒,反復(fù)多次分離,達(dá)到分離目的。差速離心主要用于分離大小和密度差異較大的顆粒。差速離心法的優(yōu)點(diǎn)是:操作簡單,離心后用傾倒法即可將上清液與沉淀分開,并可使用容量較大的角式轉(zhuǎn)子。
2.密度梯度離心法:該法又分為速率區(qū)帶離心法和等密度區(qū)帶離心法。樣品在一定惰性梯度介質(zhì)中進(jìn)行離心沉淀或沉降平衡,在一定離心力下把顆粒分配到梯度液中某些特定位置上,形成不同區(qū)帶的分離方法。該法的優(yōu)點(diǎn)是:具有很好的分辨率,分離效果好,可一次獲得較純顆粒;適用范圍廣,既能分離沉淀系數(shù)差的顆粒,又能分離有一定浮力密度的顆粒;顆粒不會積壓變形,能保持顆?;钚?,并防止已形成的區(qū)帶由于對流而引起混合。被離心的物質(zhì)根據(jù)其沉降系數(shù)不同進(jìn)行分離,同類物質(zhì)則因分子大的沉降速度快于分子小的物質(zhì)從而得到分離。密度梯度的制備可采用梯混合器,也可將不同濃度的蔗糖溶液,小心地一層層加入離心管中,越靠管底,濃度越高,形成階梯梯度。在密度梯度離心過程中,區(qū)帶的位置和寬度隨離心時間的不同而改變。隨離心時間的加長,區(qū)帶會因顆粒擴(kuò)散而越來越寬。
3.分析性超速離心法:分析型超速離心機(jī)主要由一個橢圓形的轉(zhuǎn)子、一套真空系統(tǒng)和一套光學(xué)系統(tǒng)所組成。該轉(zhuǎn)子通過一個柔性的軸連接成一個高速的驅(qū)動裝置,此軸可使轉(zhuǎn)子在旋轉(zhuǎn)時形成自己的軸。轉(zhuǎn)子在一個冷凍的真空腔中旋轉(zhuǎn),其容納兩個小室:分析室和配衡室。分析室的容量一般為1mL,呈扇形排列在轉(zhuǎn)子中,其工作原理與一個普通水平轉(zhuǎn)子相同。分析室有上下兩個平面的石英窗,離心機(jī)中裝有的光學(xué)系統(tǒng)可保證在整個離心期間都能觀察小室中正在沉降的物質(zhì),可以通過對紫外光的吸收或折射率的不同對沉降物進(jìn)行監(jiān)測。